雌激素受体α短发夹RNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌干细胞的影响

• 作者: 叶棋浓 姜丽娜 杜佩云 林佳佳 程龙 苏金为 陈立涵
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 雌激素受体α 肿瘤干细胞 短发夹RNA 流式细胞术
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 325-328
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3156字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.03.005

摘要

目的:构建特异抑制雌激素受体α(ERα)基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,检测其对ERα的干扰效果,并探讨其对MCF7细胞中乳腺癌干细胞含量的影响.方法:以人的ERα核酸序列为靶标,根据shRNA设计原则设计并化学合成特异的shRNA序列,经退火处理后与pSIH-H1质粒连接,转化大肠杆菌DHSα后挑取单克隆并测序;将该克隆进行病毒包装并感染乳腺癌MCF7细胞,用嘌呤霉素进行筛选,最终得到稳定克隆;收取细胞,用Western印迹和qRT-PCR检测ERα在mRNA及蛋白水平上的变化,流式细胞术检测敲低ERα能否影响MCF7乳腺癌干细胞的含量.结果:经测序分析表明目标shRNA序列成功插入载体,qRT-PCR检测稳定克隆,发现该shRNA能有效抑制目的基因的mRNA转录水平,同时Western印迹检测发现内源性ERα量明显下降;流式细胞术检测发现ERα敲低的MCF7稳定克隆中雌激素诱导的乳腺癌干细胞含量上升的现象被明显抑制.结论:设计并构建的抑制ERα的shRNA能够有效抑制ERα的表达,并下调MCF7细胞中乳腺癌干细胞的含量,为研究ERα在乳腺癌干细胞中的功能及机制奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶棋浓	军事医学科学院生物工程研究所	138	519	11.0	17.0
2	苏金为	福建农林大学生命科学学院	20	339	10.0	18.0
3	程龙	军事医学科学院生物工程研究所	26	79	4.0	8.0
4	杜佩云	福建农林大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
6	陈立涵	军事医学科学院生物工程研究所	3	1	1.0	1.0
7	林佳佳	军事医学科学院生物工程研究所	3	19	1.0	3.0
8	姜丽娜	军事医学科学院生物工程研究所	4	25	2.0	4.0