MTDH 靶向 RNA 干扰质粒构建及其对食管癌细胞EC9706的影响

• 作者: 伊力亚尔·夏合丁 刘涛 刘清 卢晓梅 戴芳 杨晨晨 王栋 贺家勇 郑树涛
• 来源期刊: 新疆医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: MTDH RNA 干扰技术 食管癌细胞
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1362-1366
• 页数: 5页
• 分类号: R735.1
• 字数: 3583字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-5551.2015.11.009

摘要

目的：应用 RNA 干扰技术设计构建针对 MTDH 基因的干扰质粒，观察脂质体转染食管癌细胞EC9706的干扰效果，评价 MTDH 基因对细胞增殖及细胞周期的影响。方法设计针对 MTDH 基因的3对干扰序列，分别命名为 MTDH-shRNA-1、MTDH-shRNA-2、MTDH-shRNA-3。另设计与 MTDH 基因无关序列的 Con-trol-shRNA，合成的单链 DNA 经变性、退火形成双链 DNA 与经过 Bam HI 和 Hind Ⅲ双酶切后的 pRNA-U6．1／Neo 线性质粒连接。实验设立3组：阴性对照组（正常生长的 EC9706细胞，不做任何处理）、Control-shRNA 组（转染随机序列 Control-shRNA）、MTDH-shRNA 组（转染 MTDH-shRNA），检测细胞增殖能力、细胞周期分布。结果将 MTDH-shRNA-1、MTDH-shRNA-2、MTDH-shRNA-3及 Control-shRNA 转染 EC9706细胞后，48 h 时倒置显微镜下观察可见绿色荧光细胞所占细胞的百分比＞80％，干扰载体能有效表达，转染各组与阴性对照组比较， MTDH-shRNA-1、MTDH-shRNA-2、MTDH-shRNA-3组对 MTDH mRNA 的表达都有明显的下调，差异有统计学意义（P ＜0．05），尤其是 shRNA-1组的 MTDH mRNA 的表达明显低于其它2组。选取 MTDH-shRNA-1（MT-DH-shRNA）进行细胞功能的试验。MTDH-shRNA 组细胞增殖速度明显低于 MTDH-Control 组及阴性对照组，差异有统计学意义（P ＜0．05），MTDH-shRNA 组与阴性对照组及 MTDH-Control 组比较，G0／G1期所占比例增加，而 S 期细胞所占比例减少，差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论成功构建 MTDH 干扰质粒，MTDH-shRNA-1干扰效果最好，MTDH-shRNA 抑制细胞增殖，使 EC9706细胞的细胞周期阻滞在细胞分裂周期的 S 期。质粒的构建为今后 MTDH 在食管癌等肿瘤的研究方面奠定了基础。