基于基因转染法的胸苷磷酸化酶高表达结肠癌细胞株的建立

• 作者: 刘剑 叶钿均 张继民 王绮雯
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: 胸苷磷酸化酶 基因转染 慢病毒 结肠癌细胞株
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 30-34
• 页数: 5页
• 字数: 4413字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建表达高度胸苷磷酸化酶（TP）活性并可以稳定传代的结肠癌细胞株。方法合成包含TP cDNA 全长的真核细胞表达载体，用慢病毒包装后转染人结肠癌细胞株 SW480、LOVO、HT29和 LS174T，流式细胞仪检测转染效率，实时荧光定量 RT －PCR 方法检测 TP 的 mRNA 表达，蛋白印迹法（Western blot）检测 TP 蛋白表达。结果转染 TP cDNA 后，SW480、LOVO、HT29与 LS174T 在传代5代后转染效率仍稳定在95％左右。与未转染 TP 基因的亲代细胞相比，SW480－TP、LOVO －TP、HT29－TP 与 LS174T －TP 的 TP mRNA 的表达分别提高了（694．56±171．53）、（282．46±86．85）、（8．45±0．15）和（2615．02±253．97）倍，差异有统计学意义（P ＜0．05）；并且 TP 蛋白的表达水平也显著提高。结论慢病毒载体能够高效地将 TP cDNA 转染至人结肠癌细胞 SW480、LO－VO、HT29和 LS174T 中，所得克隆能够稳定传代，并能显著提高4株结肠癌细胞 TP 的 mRNA 和蛋白表达水平。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王绮雯	广州医科大学附属第二医院外科实验室	5	10	2.0	2.0
2	刘剑	广州医科大学附属第二医院胃肠外科	2	8	2.0	2.0
3	叶钿均	广州医科大学附属第二医院胃肠外科	3	16	3.0	3.0
4	张继民	广州医科大学附属第二医院胃肠外科	6	21	3.0	4.0