利用ID-ELISA技术调查分析海南3种主要番木瓜病毒分布及感病情况

• 作者: 周鹏 庹德财 杨勇 沈文涛 王锐萍 言普 黎小瑛
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 番木瓜病毒 外壳蛋白 抗血清 ID-ELISA
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 作物病虫害及其防治,环境保护
• 页码范围: 1866-1872
• 页数: 7页
• 分类号: S41-30
• 字数: 4732字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2015.10.024

摘要

利用PCR方法分别扩增番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)、番木瓜畸形花叶病毒(papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)和番木瓜花叶病(papaya mosaic virus,PaMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并连接到原核表达载体pET-28a上,获得重组质粒pET28-PRSV-CP、pET28-PLDMV-CP和pET28-PaMV-CP,通过转化、诱导表达后,经SDS-PAGE分析显示,这3种CP蛋白在大肠杆菌中高效表达,其中PRSV CP蛋白和PLDMV CP以包涵体形式存在,PaMV CP以可溶蛋白形式存在.利用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化获得了3种病毒的重组CP蛋白,并免疫大白兔获得高效价的抗体.Western blot检测结果表明,这3种抗血清与对应的诱导表达蛋白发生特异反应.再采用抗血清建立一种快捷、简便和低成本的ID-ELISA (Indirect enzyme-linked immunosorbent assay)技术,并利用此技术对海南岛283个疑似感病的番木瓜样品进行检测鉴别,初步掌握了海南岛3种主要番木瓜病毒的分布及感病情况,为下一步该病的有效防治策略提供科学依据.