RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系的建立和鉴定

• 作者: 冯悦 吴明江 宋玉竹 张丽 张望龙 李胜营 毛小琴 牛华 贾雄飞
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: RACK1 过表达 RNA干扰 HUVEC细胞系
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 218-223
• 页数: 6页
• 分类号: Q291
• 字数: 2321字
• 语种: 中文

摘要

目的：建立有活性的蛋白激酶C受体1（RACK1）过表达和低表达人脐静脉内皮细胞系（HUVEC），为进一步从分子水平研究RACK1在心律失常中的作用机制提供有效手段。方法扩增RACK1基因的全长cDNA序列，并插入pIRES2-EGFP获得过表达载体pIRES2-EGFP-RACK1；同时，设计合成3对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列，亚克隆至pGenesil-1得到相应的干扰载体；脂质体转染法将重组体及相应的空质粒分别转染至HUVEC细胞，经 G418筛选抗性细胞克隆， qRT-PCR 及 Western blot 鉴定 RACK1 mRNA 和蛋白的表达。结果RACK1真核表达载体和RNA干扰载体构建成功。重组体经脂质体法转染HUVEC 48 h后，经G418筛选3周得到细胞抗性克隆，qRT-PCR及Western blot结果证实了过表达载体和干扰载体能有效的增强和沉默HUVEC细胞中RACK1的表达。结论成功建立了RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系。