miR-375在人胚胎干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞过程中对肝细胞核因子1β表达的调控作用

• 作者: 侯文芳 刘烨 杨进 洪天配 王海宁 高洪伟 魏蕊
• 来源期刊: 中华糖尿病杂志
• 关键词: 胰岛 人胚胎干细胞 肝细胞核因子1β miR-375
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 730-734
• 页数: 5页
• 字数: 4698字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-5809.2015.12.004

摘要

目的 探讨miR-375对人胚胎干细胞(hESC)定向分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)的调控作用及其潜在机制.方法 体外诱导hESC定向分化为IPCs,分析miR-375与其预测靶基因肝细胞核因子1β(HNF-1β)之间表达水平的动态变化关系;以miR-375过表达的慢病毒载体感染分化第二阶段细胞,实验分为空白对照组、阴性对照(GFP)组及miR-375过表达组;应用实时定量PCR和(或) Western blotting法检测各组分化细胞中miR-375、HNF-1β、胰岛细胞分化或功能相关的关键基因的表达.两组间比较用t检验,多组间比较用单因素方差分析和Q检验.结果 hESC分化五个阶段中miR-375表达水平呈先高后低的变化趋势,相对表达量分别为100%、(472.25 ± 33.53)%、(768.00 ± 25.65)%、(54.25±5.74)%、(30.75±5.70)% (F=1137.57,P<0.001).HNF-1β表达水平在分化第三阶段开始明显上升,在分化第四阶段达到高峰[分别为(279.50 ± 21.30)%、(645.00 ± 64.55)%,F=224.86,P<0.001],变化趋势与1/miR-375的变化趋势相似.慢病毒感染后,miR-375过表达组的HNF-1βmRNA表达水平与GFP组、空白对照组无显著差异(F=1.467,P>0.05),而miR-375过表达组的HNF-1β蛋白表达水平则下降至GFP组的(38.75±9.22)% (F=60.69,P<0.001).与GFP组相比,miR-375过表达组分化第四阶段细胞的胰十二指肠同源盒因子1(Pdx-1)表达水平显著升高,分化第五阶段细胞(IPCs)的Nkx6.1、配对盒因子4(Pax-4)及胰岛素的表达水平则显著降低(F=105.19~484.05,均P<0.001).结论 miR-375对hESC向IPCs定向分化具有重要的调控作用,该作用可能是通过影响转录因子HNF-1β表达而实现的.