铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株的构建

• 作者: 宋秀宇 张加勤 徐巧丽 房丽丽 饶慧华 马晓波 黄朝阳
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 clpP基因 双亲杂交 同源重组
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 627-630
• 页数: 4页
• 分类号: R378
• 字数: 2975字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.07.007

摘要

目的 构建铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株.方法 分别以质粒pUCGM和铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板PCR扩增庆大霉素抗性基因(GM)和铜绿假单胞菌clpP基因及其3 '、5 '侧翼序列,将clpP基因及其3'、5 '侧翼序列克隆至pMD19T载体,EcoRV切除clpP基因37 bp～453 bp片段后,引入庆大霉素抗性基因,构建重组质粒pCKR2;EcoR Ⅰ/HindⅢ双酶切重组质粒pCKR2,回收FclpP-GM-clpPR片段,与自杀质粒pEX18Tc连接,得到clpP基因缺陷的同源重组载体pCKR3;将pCKR3质粒转化大肠埃希菌SM10,与铜绿假单胞菌PAO1双亲杂交,庆大霉素筛选得到铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株.结果 经酶切鉴定同源重组载体pCKR3构建正确;PCR和DNA测序鉴定铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株构建成功.结论 本研究成功敲除了铜绿假单胞菌clpP基因,为进一步研究clpP基因的生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄朝阳	厦门大学附属第一医院检验科	38	159	7.0	11.0
2	张加勤	厦门大学附属第一医院检验科	22	70	5.0	7.0
3	马晓波	厦门大学附属第一医院检验科	41	131	6.0	8.0
4	房丽丽	厦门大学附属第一医院检验科	14	43	4.0	6.0
5	饶慧华	厦门大学附属第一医院检验科	1	1	1.0	1.0
9	徐巧丽	厦门大学附属第一医院检验科	1	1	1.0	1.0