去除紫花苜蓿叶片高丰度蛋白的方法及其应用

• 作者: 刘慧莹 尚晨 张月学 张海玲 李佶恺 陈晶 韩贵清
• 来源期刊: 草业学报
• 关键词: 高丰度蛋白 核酮糖-l,5-二磷酸羧化/加氧酶 聚乙二醇 紫花苜蓿 蛋白质组学
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 131-138
• 页数: 8页
• 字数: 5699字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11686/cyxb2015044

摘要

紫花苜蓿叶片中大量的高丰度蛋白（核酮糖-l，5-二磷酸羧化／加氧酶，Rubisco）干扰了蛋白质的动态分辨率，严重影响蛋白质组学研究中功能蛋白的检测与鉴定。为了探究去除高丰度蛋白的适宜方法，本研究利用 Mg／NP-40与聚乙二醇（PEG）预分离紫花苜蓿叶片蛋白，通过双向凝胶电泳法比较了不同浓度 PEG 对叶片高丰度蛋白的分离情况。电泳图谱显示0，15％，17．5％，20％PEG 处理的蛋白质中分别可以检测到（335±17），（417±3），（445±7），（459±11）个蛋白质点，0，15％，17．5％处理组间差异显著（P ＜0．05），17．5％和20％PEG 处理组间没有差异（P ＜0．05）。然而，17．5％PEG 能够检测到更多的差异蛋白质点，证明其更能有效沉淀高丰度蛋白，便于检测被Rubisco 遮盖的蛋白质点。将该方法应用于紫花苜蓿叶片响应低温胁迫的蛋白质组学研究中检验其应用效果，与三氯乙酸／丙酮法提取的全蛋白相比，去除高丰度蛋白后鉴定出8个新的蛋白质差异点，证明该方法适用于实际的蛋白质组学研究。可见，Mg／NP-40与17．5％PEG 法是最适宜去除紫花苜蓿叶片高丰度蛋白的方法。