一种新型ATP-依赖型ClpP家族蛋白质水解酶PlclpP基因的克隆、表达和酶学特性

• 作者: 李云霞 龚丽
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: ClpP家族蛋白质水解酶 芽孢杆菌 基因克隆 基因表达 酶学特性
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 加工贮藏?质量安全
• 页码范围: 1424-1429
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 3678字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2015.06.036

摘要

运用基因克隆技术，以分离鉴定获得的蛋白质水解酶高活性类芽孢杆菌（ Paenibacillus lautus） CHN26菌株基因组DNA为模板，克隆鉴定了该菌株一种新型ATP?依赖型ClpP家族蛋白质水解酶PlclpP基因（585 bp），编码194个氨基酸，蛋白质分子量约为2．1×104。采用大肠杆菌（Eschericia coli） pET表达系统，构建了PlclpP基因表达质粒pET?28?PlclpP，并在大肠杆菌BL21中实现了重组PlClpP蛋白质的表达。利用组氨酸标签（ His?tag）亲和纯化法，获得了PlClpP纯化蛋白质，发现PlClpP可能与宿主菌未知伴侣分子形成蛋白质复合物。 PlClpP复合物具有ATP?依赖型酪蛋白水解酶活性，最适反应条件为40℃、pH7?0。表面活性剂强烈抑制PlClpP复合物的酶活，而常规丝氨酸蛋白酶抑制剂对其活性无抑制作用。