猪 APOBEC3F基因真核表达载体的构建及其在MARC145细胞中的表达定位

• 作者: 孟春花 曹少先 朱前明 李隐侠 李静心 王春玲
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: APOBEC3F 真核表达载体 MARC145细胞 转染 荧光定量PCR 脂质体 猪
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医?水产养殖
• 页码范围: 1344-1349
• 页数: 6页
• 分类号: S858.65
• 字数: 3418字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2015.06.023

摘要

载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3F（ APOBEC3F）属固有免疫系统中的重要成员，对人免疫缺陷病毒（ HIV）、乙型肝炎病毒（ HBV）等多种病毒的复制具有广泛的抑制作用。为构建APOBEC3F基因的真核表达载体，并检测其在体外培养的MARC145细胞中的表达情况，通过RT?PCR从猪脾脏组织扩增APOBEC3F基因，定向克隆到表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的真核表达载体pEGFP?CMV中，构建pEGFP?APOBEC3F。 PCR扩增及测序显示，APOBEC3F插入载体位置、方向及序列均正确。 pEGFP?APOBEC3F经脂质体介导法转染MARC145细胞，转染后24 h APOBEC3F mRNA的水平升至最高。细胞免疫化学法检测发现APOBEC3F蛋白主要在MARC145细胞质中表达。研究结果为体外研究猪APOBEC3F基因在抗猪蓝耳病中的作用奠定了基础。