miR-195通过靶定RET调控神经母细胞瘤的侵袭

• 作者: 朱永洁 段于河 董蒨 陈鑫 韩芦芦
• 来源期刊: 中华小儿外科杂志
• 关键词: 神经母细胞瘤 侵袭 转染
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 775-779
• 页数: 5页
• 字数: 3783字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2015.10.014

摘要

目的 神经母细胞瘤是儿童常见的恶性疾病,转移是致死的主要因素,其中微小RNA(microRNA,miRNA)在该疾病的转移中具有很重要的作用.本研究旨在探索miR-195是否通过RET调节神经母细胞瘤细胞的侵袭.方法 在神经母细胞瘤细胞中转染mimics control和miR-195mimics,建立过表达miR-195的细胞模型.通过Transwell侵袭实验研究过表达miR-195对侵袭的影响.利用生物信息学检测miR-195的靶基因,并应用荧光素酶报告基因鉴定其对靶基因3'UTR的结合序列.实时定量PCR及western检测过表达miR-195对靶基因mRNA及蛋白的改变.应用siRNA干扰建立抑制靶基因的细胞模型,通过Transwell侵袭实验检测敲减靶基因对侵袭的影响.最后建立恢复靶基因表达的细胞模型,通过Transwell侵袭实验验证能力的恢复.结果 在SH-SY5Y和SK-N-SH内,均成功过表达miR-195的相对水平分别为34±1.19和43±1.71,与对照组相比具有显著差异(P＜0.001).SH-SY5Y过表达miR-195后发生侵袭的细胞数由93±2降至62±1,SK-N-SH过表达miR-195后发生侵袭的细胞数由82±2降至56±5,过表达miR-195后显著抑制细胞侵袭(P＜0.05);生物信息学检测miR-195能够结合RET mRNA的3 'UTR.过表达miR-195显著抑制RET的mRNA和蛋白质水平(P＜0.05).过表达miR-195显著抑制报告质粒RET 3' UTRWT的荧光素酶的相对活性(P＜0.05).RNA干扰均抑制两种细胞内RET(一个在转化中发生重排的原癌基因,RET原癌基因)的mRNA和蛋白的水平(P＜0.05).在SH-SY5Y内,敲减RET后发生侵袭的细胞数目由89±2降至62±5,在SK-N-SH中由78±2降至63±1,均具有显著差异(P＜0.05).在恢复实验中,对照组和实验组发生侵袭的数目分别为84±3、64±9、65±5和82±1,恢复RET表达恢复细胞的侵袭能力.结论 miR-195与神经母细胞瘤侵袭能力相关,并且能够通过靶向RET调节神经母细胞瘤细胞的侵袭.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董蒨	青岛大学附属医院小儿外科	92	296	10.0	13.0
2	陈鑫	青岛大学附属医院小儿外科	28	69	5.0	7.0
3	段于河	青岛大学附属医院小儿外科	18	48	5.0	6.0
4	朱永洁	青岛大学附属医院小儿外科	12	26	3.0	4.0
5	韩芦芦	青岛大学附属医院手术室	6	27	3.0	5.0