利用Gateway技术改造原核表达载体pGEX-4T-1、pET-28a

• 作者: 吴刚 胡丽松 范睿 谭乐和 邬华松 郝朝运
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Gateway技术 载体改造 胡椒PnHMGB 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 生物技术与组织培养
• 页码范围: 1445-1450
• 页数: 6页
• 分类号: Q936
• 字数: 3988字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2015.08.014

摘要

质粒载体是基因工程研究中不可或缺的工具.为提高载体构建效率,进一步满足基因工程研究在构建表达载体时的需要,本文提供了一种重组型载体的改造策略.基本流程如下:利用带Bgl Ⅱ、Xho Ⅰ酶切位点以及attB重组序列的引物,从Gateway的入门载体pDONR Zeo中克隆到“Bgl Ⅱ-attB 1-ccdB-attB2-Xho Ⅰ”片段.通过酶切连接的方法,将该片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1以及pET-28a的多克隆位点,构建具有重组位点以及ccdB致死基因的原核表达载体.以胡椒High mobility group protein(HMGB)基因的开放读码框为目标片段,通过重组反应将目的基因构建到改造后的原核表达载体上,经检测体外诱导表达出大小正确的HMGB蛋白,验证本研究中改造载体的正确性.该载体的成功构建,为基因工程科研工作提供了一个高效的蛋白表达载体以及载体改造的新策略.