Waardenburg综合征致病蛋白MITF核定位信号的鉴定及其功能研究

• 作者: 冯娟 冯永 张华 李家大 罗浑金 陈红胜
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 关键词: MITF蛋白 Waardenburg综合征 核定位信号
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 805-809
• 页数: 5页
• 字数: 4281字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2015.06.011

摘要

目的 对MITF蛋白核定位信号(nuclear localization signals,NLS)进行鉴定并探讨其功能异常在Waardenburg综合征(Waardenburg syndrome,WS)发病中的作用.方法 通过分子克隆技术设计突变引物,以野生型真核细胞表达质粒pCMV-MITF-Flag (MITF)为模板构建突变型真核细胞表达质粒pCMV-MITF△NLS-Flag(MITF△NLS),并将二者瞬时单转或共转染UACC903细胞进行荧光素酶活性检测,观察其对靶基因酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)转录活性的影响.将MITF NLS核苷酸序列5'-GAACGAAGAAGAAGATTT-3'克隆到真核细胞表达质粒pEGFP-N1上,构建重组真核细胞表达质粒pEGFP-N1-MITF-NLS(pEGFP-N1-NLS).将MITF、MITF△NLS、pEGFP-N1和pEGFP-N1-NLS分别瞬时转染NIH3T3细胞后,利用免疫荧光检测对其亚细胞定位进行观察.结果 成功构建了MITF△NLS和pEGFP-N1-NLS的真核细胞表达质粒,前者缺失MITF的NLS核心序列213ERRRRF218,后者则偶联了MITF NLS.与野生型MITF相比,MITF△NLS完全失去了激活TYR启动子作用,并且不影响野生型MITF的正常功能.与野生型MITF仅在细胞核分布相比,MITF△NLS仅在细胞质分布.pEGFP-N1在细胞核与细胞质中均有分布,而pEGFP-N1-NLS主要在细胞核分布.结论 验证并明确了213ERRRRF218在MITF蛋白中的NLS核心序列,缺失NLS的MITF突变蛋白出现异常亚细胞定位而失去调控靶基因TYR转录活性功能可导致WS临床表型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张华	新疆医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科	100	552	13.0	17.0
5	冯永	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	102	545	12.0	16.0
6	冯娟	新疆医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科	58	206	8.0	12.0
7	陈红胜	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	18	70	5.0	7.0
8	李家大	中南大学湘雅医院医学遗传学国家重点实验室	11	12	2.0	3.0
9	罗浑金	中南大学湘雅医院医学遗传学国家重点实验室	5	9	2.0	3.0