干细胞相关因子在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达

• 作者: 刘慧萍 刘文娥 喻嵘 张国民 李玲 林政桦 谷旭宇
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 培养 卵巢颗粒细胞 干细胞样细胞 干细胞特性 集落现象 阳性标志物 体外培养 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 页码范围: 78-84
• 页数: 7页
• 分类号: R394.2
• 字数: 7994字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.01.014

摘要

背景：现有研究表明，人与大鼠卵巢优势卵泡中的颗粒细胞具有表达干细胞特性的现象。目的：探讨干细胞相关因子在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达。方法：将大鼠卵巢组织制作石蜡切片后，使用免疫组化法检测CD34，CD133，ABCG2/Bcrp1，Pou5f1/Oct-4的表达。卵泡穿刺法获取颗粒细胞，并使用免疫组化法检测FSHR受体的表达以鉴定颗粒细胞的纯度。免疫组化法检测颗粒细胞 CD44， C-Kit 的表达情况， RT-PCR 检测卵巢组织与颗粒细胞 ABCG2/Bcrp1、Pou5f1/Oct-4、Nanog基因的表达情况。结果与结论：免疫组化法石蜡切片显示部分卵巢颗粒细胞CD34，CD133，ABCG2/Bcrp1，Pou5f1/Oct-4阳性表达，而Pou5f1/Oct-4蛋白的表达在卵泡发育的周期中逐步增多，并在黄体化的时候显著增强，形成白体后则消失，因而具有周期性表达的特点。卵泡穿刺法提取的原代颗粒细胞FSHR受体鉴定阳性率在95%以上。体外培养的颗粒细胞以长梭形或菱形为主，部分细胞有聚集生长现象，且 CD44，C-Kit 阳性表达。RT-PCR检测结果显示，卵巢组织与体外培养的颗粒细胞均不表达 Nanog，卵巢低表达 Pou5f1/Oct-4，强烈表达ABCG2/Bcrp1，颗粒细胞微弱表达Pou5f1/Oct-4，而ABCG2/Bcrp1表达较强。以上结果显示大鼠卵巢中的部分颗粒细胞具有干细胞的特性。