重组同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的表达纯化及表征

• 作者: 奚学志 孙培培 曹利民 王利群 王炜煜
• 来源期刊: 医药导报
• 学科: 医学
• 关键词: 同型半胱氨酸α,γ-裂解酶 表达纯化 表征
• 年，卷（期）: 2015,（z1）
• 所属期刊栏目: 药物研究
• 页码范围: 4-7
• 页数: 4页
• 分类号: R977.3
• 字数: 4862字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1004-0781.2015.z1.002

摘要

目的 研究以包涵体形式表达的重组同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的表达、纯化,对其活性进行检测并对其酶学性质进行表征.方法 将同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的重组表达载体pET-15 b/rHCYase转化大肠埃希菌BL21中,进行优化大量表达.使用Ni2亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,再通过His-Trap脱盐柱脱盐,采用MBTH法检测目的蛋白活性,并对该酶进行了表征.结果 重组蛋白在大肠埃希菌中可以高效表达,产量为204 mg·L-1,比活约206 U·mg-1.相对分子质量为45 200.重组酶的最适反应温度为35℃,酶活性稳定的温度范围为20～35℃.重组酶的最适反应pH为7.5,4℃下在pH7.5的缓冲溶液中保温5h酶稳定性最高.结论 成功克隆和表达了rHCYase蛋白,并得到高产高酶活的可溶性蛋白,对同型半胱氨酸检测试剂的开发有一定的潜在应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王炜煜	华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科	15	65	5.0	7.0
2	王利群	常州大学制药与生命科学学院	26	49	4.0	5.0
3	孙培培	常州大学制药与生命科学学院	2	0	0.0	0.0
4	曹利民		2	0	0.0	0.0
5	奚学志	常州大学制药与生命科学学院	2	0	0.0	0.0