基于内参的大肠埃希氏菌O157:H7实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

• 作者: 李静 段永生 王建昌 王金凤 陈志敏 陈瑞春
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠埃希氏菌O157:H7 rfbE Flic 实时荧光定量PCR 内参
• 年，卷（期）: 2015,（20）
• 所属期刊栏目: 安全检测
• 页码范围: 226-231
• 页数: 6页
• 分类号: R155.5
• 字数: 4573字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201520044

摘要

针对大肠埃希氏菌O157:H7 rfbE和Flic靶基因保守序列,设计特异性引物和探针,优化反应体系,并加入内参(internal amplification control,IAC),建立能够实时监控反应过程的荧光定量聚合酶链式反应(polymease chain reaction,PCR)检测方法.结果表明,该方法对Ecoli O157:H7基因组DNA的最低检测限为1 pg/μL;对含有靶基因质粒的最低检测限为103 copies/μL;对细菌的最低检测限为5×103 CFM/mL;Ct值与模板拷贝数均呈良好的线性关系(R2=0.999).人工污染实验结果表明,在初始菌量为7 CFM/25 g时,采用水洗加试剂盒法提取DNA,E.coli O157:H7在增菌6h后即可检出;而采用水煮法提取DNA,则在增菌10 h后方可检出.建立的E.coli O157:H7实时荧光定量PCR方法,既能有效检测食品中O157:H7,又能实时监测PCR反应过程,有效防止"假阴性"的发生.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈瑞春	河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心	28	265	9.0	15.0
2	段永生	河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心	9	38	4.0	5.0
3	李静	河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心	15	41	4.0	5.0
4	王建昌	河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心	38	161	6.0	10.0
5	王金凤	河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心	25	113	5.0	9.0
6	陈志敏	河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心	6	27	3.0	5.0