靶向cortactin基因的shRNA重组质粒的构建和筛选

• 作者: 严栋梁 朱建伟 袁岱岳 邵伟斌 郝清亚
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: Cortactin 短发夹状RNA RNA干扰 肝癌
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 984-987
• 分类号: R73-3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2015.10.007

摘要

目的 构建靶向cortactin基因的shRNA重组质粒,并筛选出沉默cortactin基因效果最明显的shRNA重组质粒.方法 设计并合成3对针对cortactin基因不同位点的shRNA片段,构建相应的重组质粒(命名为pBSilence1.1-cortactin-shRNA 1-3),并进行酶切鉴定和测序分析.通过脂质体转染方法将各重组质粒及阴性对照质粒分别转染至人肝癌HepG2细胞中,转染24 h后荧光显微镜下观察各组细胞的转染情况,并采用RT-PCR检测各组细胞mRNA的表达情况.结果 构建的重组质粒经酶切鉴定与测序分析证实完全符合设计要求,转染成功的细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光,3组重组质粒组HepG2细胞的cortactin基因mRNA表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).与pBSilence 1.1-cortactin-shRNA1和pBSilence1.1-cortactin-shRNA2两组相比,pBSilence 1.1-cortactin-shRNA3组的cortactin基因mRNA表达降低更加显著(P＜0.05).结论 成功构建并筛选的重组质粒能有效抑制HepG2细胞中cortactin基因mRNA表达,为下一步研究沉默cortactin基因对肝癌细胞生物学行为的影响提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱建伟	南通大学附属医院普外科	71	277	8.0	13.0
2	严栋梁	南通市第一人民医院普外科	9	20	3.0	3.0
3	邵伟斌	南通市第一人民医院普外科	14	25	3.0	4.0
4	袁岱岳	南通市第一人民医院普外科	7	13	2.0	3.0
5	郝清亚	南通市第一人民医院普外科	3	7	2.0	2.0