重组小鼠碱性成纤维细胞生长因子在CHO-K1-SFS细胞中的表达

• 作者: 冯若飞 包晓婧 张海霞 徐雷 李向茸 谢晶莹 马忠仁
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 碱性成纤维细胞生长因子 CHO-K1-SFS细胞 真核细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 564-569
• 分类号: Q575|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 构建小鼠碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF,亦称FGF-2)的真核表达质粒,并于无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞中进行表达.方法 以小鼠垂体组织总RNA为模板,PCR扩增bFGF基因,并克隆至真核表达载体pEGFP-C1,构建重组表达质粒pEGFP-C 1-bFGF,经Lipofectamine 2000介导转染无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞,荧光显微镜观察CHO-K1-SFS细胞中EGFP的表达情况,普通光学显微镜观察CHO-K1-SFS细胞的生长状况和细胞形态,RT-PCR法检测CHO-K1-SFS细胞中bFGF基因的转录,Western blot法检测CHO-K1-SFS细胞中bFGF蛋白的表达.结果 重组表达质粒pEGFP-C1-bFGF经双酶切(BglⅡ/Sal I)鉴定证明构建正确;重组质粒pEGFP-C1-bFGF转染后24、48、72及96 h的CHO-K1-SFS细胞均可见特异性绿色荧光蛋白表达,重组质粒pEGFP-C1-bFGF转染对CHO-K1-SFS细胞形态和增殖速率不产生影响;pEGFP-C1-bFGF转染组CHO-K1-SFS细胞可扩增出510 bp的目的条带;pEGFP-C1-bFGF转染组可见相对分子质量约44 000的特异性条带,表达产物可与兔抗bFGF多克隆抗体发生特异性结合.结论 构建的真核表达质粒pEGFP-C1-bFGF在无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞中成功的表达,为进一步实现小鼠bFGF在哺乳动物细胞中的分泌表达及药物开发奠定了基础.