慢病毒载体靶向介导p66shc基因沉默

• 作者: 康兰 张婵 李清平 翟雪松 董文斌 赵帅 郭琳 雷小平
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 历史
• 关键词: 慢病毒属 RNA干扰 p66shc
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 73-75,83
• 页数: 4页
• 分类号: K373
• 字数: 3317字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2015.01.026

摘要

目的：构建p66shc基因重组慢病毒表达载体，并将之转染至293T细胞，通过RNA干扰致使p66shc基因沉默，为进一步研究p66shc基因功能奠定基础。方法筛选3个RNA靶点，命名为p66shc‐shc1、p66shc‐shc2、p66shc‐shc3，与双酶切后的pLenR‐绿色荧光蛋白（GPH）（含有GFP表达）连接，转化入感受态的DH5α细胞，挑取阳性克隆测序正确后，与pRsv‐REV、pM‐Dlg‐pRRE、pMD2G一起转染293T细胞，于倒置荧光显微镜下检测GFP的表达，证实病毒包装成功。使用荧光定量PCR及Westernblot技术检测p66shc在基因及蛋白水平的表达，选取有效沉默p66shc基因的p66shc‐shc1靶点，为后续试验做准备。结果成功构建表达p66shc的shRNA慢病毒载体并转染至真核生物细胞内，通过荧光定量PCR及Westernblot技术检测其通过RNA干扰导致细胞内p66shc基因沉默。结论靶向表达p66shc的shRNA慢病毒载体，转染入真核生物细胞内可通过RNA干扰在分子及蛋白水平导致p66shc基因沉默。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董文斌	泸州医学院附属医院新生儿科	123	667	15.0	17.0
2	李清平	泸州医学院附属医院新生儿科	61	316	10.0	15.0
3	翟雪松	泸州医学院附属医院新生儿科	53	263	9.0	13.0
4	雷小平	泸州医学院附属医院新生儿科	48	237	9.0	13.0
5	康兰	泸州医学院附属医院新生儿科	19	121	6.0	10.0
6	郭琳	泸州医学院附属医院新生儿科	32	158	7.0	11.0
7	张婵	泸州医学院附属医院新生儿科	4	30	2.0	4.0
8	赵帅	泸州医学院附属医院新生儿科	4	30	2.0	4.0