杜鹃花ISSR-PCR反应体系的建立和优化

• 作者: 张传进 方元平 查三省 王书珍 程呈 金卫斌
• 来源期刊: 北方园艺
• 学科: 农学
• 关键词: 杜鹃花 ISSR-PCR 引物筛选 正交优化
• 年，卷（期）: 2015,（14）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 111-114
• 分类号: S685.21
• 语种: 中文
• DOI: 10.11937/bfyy.201514029

摘要

以杜鹃花为试验材料,采用正交实验方法,研究模板DNA浓度、ISSR引物浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶浓度、Mg2+浓度等5个因素对ISSR-PCR反应体系的影响,以建立适合杜鹃花的ISSR-PCR最佳扩增体系.结果表明:杜鹃花ISSR反应体系的最佳条件为模板DNA用量为60 ng/20μL,ISSR引物浓度0.60 μmol/L,dNTPs浓度0.50 μmol/L,Taq DNA聚合酶浓度30 U/mL,Mg2+浓度为0.6 mmol/L.采用该反应体系可以从10份杜鹃花(R.simsii)基因组内扩增出稳定性高、重复性好ISSR-PCR产物.该研究为杜鹃花的遗传多样性分析、ISSR指纹图谱构建、亲缘关系鉴定等研究奠定了基础.