木尔坦棉花曲叶病毒及其伴随的β卫星分子复合侵染引起广东棉花曲叶病

• 作者: 何自福 佘小漫 杜振国 汤亚飞 蓝国兵
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 棉花曲叶病 木尔坦棉花曲叶病毒 β卫星分子 侵染性克隆 致病性
• 年，卷（期）: 2015,（16）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 3166-3175
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.16.007

摘要

【目的】明确引起广东棉花曲叶病的病原，为该病害的防控提供理论依据。【方法】应用 PCR、滚环扩增（rolling circle amplification，RCA）、基因克隆及测序等技术获得病毒分离物GD01基因组及卫星分子的序列，并对序列进行分析；通过构建 GD01及其β卫星分子的侵染性克隆 pGreenⅡ049-1.6A、pGreenⅡ049-2.0β和利用农杆菌介导的注射接种方法，测定GD01及其β卫星分子对棉花的致病性；进一步通过Southern blot检测对接种植株进行分析与验证。【结果】侵染广东棉花的病毒分离物GD01基因组仅含A组分（DNA-A），其全长为2737 nt，且与在中国发现的木尔坦棉花曲叶病毒（Cotton leaf curl Multan virus, CLCuMuV）第一个分离物朱槿分离物 G6序列相似性为100%。该病毒分离物也伴随有β卫星分子，其全长为1345 nt，与 G6伴随的β卫星分子（Cotton leaf curl Multan betasatellite isolate G6, CLCuMuB-[G6]）序列相似性为99.9%。构建了GD01 DNA-A及其β卫星分子侵染性克隆pGreenⅡ049-1.6A、pGreenⅡ049-2.0β，农杆菌注射接种本氏烟，接种后15 d，二者混合接种的本氏烟植株新出的叶片表现明显的皱缩、卷曲等症状；随着时间的推移，本氏烟的症状越来越明显。农杆菌注射接种棉花，接种后30 d，二者混合接种的棉花植株新出叶片开始出现叶脉变深绿色，叶片卷曲等症状；接种后90 d，二者混合接种的植株大部分叶片表现为叶片向上卷曲、叶脉深绿色、叶脉肿大等典型棉花曲叶症状，且与田间自然病株症状相同，而二者各自单独接种的棉花植株没有产生明显的症状。Southern blot 检测结果显示,表现典型曲叶症状的接种棉花植株均含有GD01 DNA-A及其β卫星分子，进一步支持这些症状是由GD01 DNA-A及其β卫星分子的共同侵染引起。【结论】病毒分离物 GD01 DNA-A 及其伴随的β卫星分子与入侵中国的 CLCuMuV第一个分离物朱槿分离物G6相同，CLCuMuV -[GD01]及其伴随的CLCuMuB -[GD01]复合侵染引起广东棉花曲叶病，利用农杆菌介导的侵染性克隆接种法，完成了 CLCuMuV 及其 CLCuMuB 复合侵染引起棉花曲叶病的柯赫氏法则(Koch's Postulates)。