靶向肿瘤坏死因子β小分子抑制剂的筛选及其功能鉴定

• 作者: 公海艳 刘鹏 孙亚薇 曹善楠 朱海燕 耿广锋 许元富
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 淋巴毒素α 受体,肿瘤坏死因子,Ⅰ型 细胞凋亡 细胞周期 肿瘤坏死因子β 小分子抑制剂 信号通路
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 961-964,1089
• 页数: 5页
• 分类号: R730.231|R730.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/j.issn.0253-9896.2015.09.001

摘要

目的：通过计算机虚拟筛选和细胞活性筛选，获得能靶向抑制肿瘤坏死因子β（TNFβ）的细胞毒活性的小分子抑制剂。方法根据TNFβ与肿瘤坏死因子Ⅰ型受体（TNFR1）结合的复合晶体结构，采用计算机虚拟筛选方法初步选择对接结果较好的105个小分子化合物（C1~C105），并对其进行细胞活性筛选；MTT法检测小分子化合物抑制TNFβ对L929细胞的细胞毒性；流式细胞术测定小分子化合物对TNFβ引起的细胞凋亡的抑制作用；采用碘化丙啶（PI）单染和流式分析技术检测小分子化合物对L929细胞周期的影响；采用Western blot和双转盘激光共聚焦显微镜分析小分子化合物对TNFβ引起的下游Caspase 3活化的抑制作用。结果 C35能有效抑制TNFβ引起的细胞毒作用，且这种抑制作用呈现剂量依赖性（半数抑制浓度=8.19μmol/L)；C35具有较低的细胞毒性，且对L929细胞周期无影响；C35能阻断TNFβ与其受体结合后引起的细胞凋亡通路，显著抑制TNFβ引起的L929细胞凋亡。结论成功筛选到一个TNFβ小分子抑制剂C35，其能阻断TNFβ引起的细胞凋亡通路，高效抑制TNFβ的细胞毒活性。