基于流动注射光度法的吸光度/留存时间比自动测定过氧化物酶活性方法

• 作者: 李永生 郑巍 高秀峰
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 流动注射分析 过氧化物酶 萝卜提取液 愈创木酚 过氧化氢
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1580-1588
• 页数: 9页
• 字数: 7914字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11895/j.issn.0253-3820.150354

摘要

本研究给出了流动注射分光光度系统(FI-SP)测定酶活性浓度(昱c)的通用公式Ec=k△A/△t;△t是在酶促反应线性响应区域内试样塞的平均留存时间;△A为平均留存时间处对应的吸光度;k=nV/(εvL),V为样品注入点到流通池入口之间的管路总容积,n为酶底物与产物的反应摩尔比,ε为产物的摩尔吸收系数,v为注入的酶液体积,L为流通池光程;FI-SP系统确定后k为常数.在此基础上,将H2O2/过氧化物酶(POD)/愈创木酚(GA)反应体系导入FI-SP系统,建立了一种无需标准曲线的POD活性快速准确测定的新方法.此方法优化后的条件:载流磷酸盐缓冲液浓度为0.05 mol/L(pH 5.5),进样体积为40 μL,反应盘管长度200 cm,1.5 mmol/L H2O2,3.5 mmol/L GA,0.4 mol/L HCI(清洗液),检测波长470 nm,产物的摩尔吸光系数为0.0125 L(μ,mol·cm).本方法的重现性RSD＜0.38％ (n=11),分析速度为40样/h,测定范围为450-7260 U/L,检出限为89 U/L.在优化条件及60℃下,用本方法测定了多种白萝卜中POD活性,结果与动力学曲线法完全相同.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李永生	四川大学化学工程学院	75	302	9.0	13.0
2	高秀峰	四川大学基础医学与法医学院	51	202	7.0	11.0
3	郑巍	四川大学化学工程学院	2	2	1.0	1.0