猪Viperin主要抗原区的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 张纹纹 李文良 杨蕾蕾 毛立 江杰元 韩林晓
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: Viperin 原核表达 多克隆抗体 猪
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 兽医科技
• 页码范围: 82-85
• 页数: 4页
• 分类号: S855.3
• 字数: 2762字
• 语种: 中文

摘要

采用PCR方法扩增猪Viperin蛋白主要抗原区基因,克隆入原核表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21构建重组表达菌,经IPTG诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE鉴定蛋白得到表达,分子质量约为40 ku.进一步优化蛋白表达条件为:IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导5h.采用His标签单抗对重组蛋白进行Western blot鉴定表明蛋白具有良好的抗原性.将蛋白质纯化后免疫新西兰大白兔,间隔14 d免疫4次,并采集血清.用间接ELISA方法测定血清抗体效价,结果表明,经过4次免疫血清抗体效价达到1:409600,间接免疫荧光检测出现特异荧光,表明其能与Viperin蛋白发生反应.本试验为研究Viperin的功能、建立特异的检测方法奠定了基础.