毕赤酵母表达的猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白及其免疫原性分析

• 作者: 姜世金 康雪燕 张培君 张莉 李永清 盖丽丽 章振华
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 毕赤酵母 猪传染性胃肠炎病毒 纤突糖蛋白S基因 免疫原性
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 页码范围: 84-90
• 页数: 7页
• 分类号: S432.4|Q78
• 字数: 6300字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2015.06.013

摘要

为了获得具有良好免疫活性的基因工程抗原蛋白,利用毕赤酵母真核表达系统,表达猪传染性胃肠炎(河北分离株)的纤突糖蛋白.根据GenBank TGEV S基因设计一对引物,经PCR扩增出长2.2 kb的目的基因S,将S基因亚克隆于pPIC9k载体,转化TOP10感受态,PCR、酶切鉴定阳性克隆,SalⅠ线性化重组穿梭质粒pPIC9k-S,然后电转GS115感受态,利用G418抗性进行多拷贝整合子初步筛选,提取基因组并做PCR鉴定,得到阳性菌株,经诱导发酵后,上清发酵液经SDS-PAGE电泳检测,显示获得分子量为82 kDa左右的目的蛋白,同时用Western-Blotting检测到一条特异的目的条带;用目的蛋白免疫小鼠,ELISA检测免疫S蛋白小鼠血清抗体效价为1∶100,表达蛋白具有免疫活性.