20S蛋白酶体β5亚单位基因沉默对人骨髓间充质干细胞增殖能力的影响

• 作者: 刘雪芹 宋慧芳 张伟 杨桂姣 苗苗 陆利
• 来源期刊: 解剖学杂志
• 关键词: 人骨髓间充质干细胞 20S蛋白酶体β5亚单位 基因沉默 增殖
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 153-156
• 页数: 4页
• 字数: 3126字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1633.2015.02.008

摘要

目的:应用基因沉默技术,观察下调20S蛋白酶体β5亚单位(PSMB5)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖能力的影响及其潜在机制,寻求调节干细胞活力的关键靶点.方法:构建PSMB5-shRNA慢病毒载体感染早期hBMSCs,根据感染条件不同将细胞分为绿色荧光蛋白(GFP)对照组和shRNA组.倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和免疫印迹检测PSMB5沉默效率,荧光分光光度法检测蛋白酶体活性;BrdU掺入实验观察PSMB5基因沉默对早期hBMSCs增殖潜能的影响,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹检测细胞周期相关蛋白1(cyclin D1)及其激酶CDK4的表达变化.结果:慢病毒感染早期hBMSCs 72 h可见约95％以上细胞表达绿色荧光蛋白.shRNA组PSMB5 mRNA和蛋白表达水平较GFP对照组分别降低93.31％±0.59％和56.83％±13.31％,且蛋白酶体活性较对照组降低37.47％±0.41％.此外,shRNA组BrdU阳性率26.14％±8.13％较对照组49.53％±11.18％显著降低,G1期细胞较GFP对照组增多,而S期和G2/M期细胞却较对照组减少,Cyclin D1和CDK4的表达水平分别下降54.55％±7.76％和63.26％±15.76％.结论:PSMB5基因沉默能够下调Cyclin D1和CDK4的表达,导致细胞G1/S转换停滞,影响hBMSCs增殖潜能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨桂姣	山西医科大学人体解剖学教研室	114	349	9.0	10.0
2	宋慧芳	山西医科大学人体解剖学教研室	21	39	4.0	4.0
3	陆利	山西医科大学人体解剖学教研室	38	155	7.0	10.0
4	张伟	山西医科大学人体解剖学教研室	24	48	4.0	5.0
5	苗苗	山西医科大学第二临床医学院	4	8	2.0	2.0
6	刘雪芹	山西医科大学人体解剖学教研室	8	34	4.0	5.0