含有Th细胞表位的合成PCV2 ORF2 Cap多肽抗原的表达及免疫原性分析

• 作者: 李中圣 李其昌 王贵平 罗均 赵焱 陈克宏 陈善真
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: PCV2 Th细胞表位多肽 Cap蛋白
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 2273-2281
• 页数: 9页
• 分类号: S852.4
• 字数: 6472字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.12.020

摘要

拟测定在PCV2ORF2 Cap P1多肽抗原中添加从PCV2ORF1、ORF3中筛选的Th细胞表位多肽在促进其免疫原性中的作用,以及合成表达的PCV2ORF2 Cap P1多肽抗原作为疫苗抗原的可行性.采用生物信息学及分子生物学方法,筛选获得1条泛宿主新型Th细胞表位多肽和3条PCV2特异的含有Th细胞抗原表位的多肽序列,然后将这4条Th细胞多肽氨基酸序列与筛选自ORF2 Cap1上的1条B细胞表位多肽序列进行串联组合,密码子优化,插入酶切位点、终止密码子,然后进行密码子适应指数和分布频率分析,预测可以实现高效表达后再进行化学合成.合成的P1多肽抗原连接到pET-30a表达载体,并转化至BL21 (DE3) pLysS感受态细胞中,构建表达工程菌BL21 (DE3) pLysS-pET-30a-P1.经IPTG诱导表达后P1可实现高效表达,SDS-PAGE鉴定表达量,Western Blot鉴定其生物活性,然后分别免疫小鼠和猪,测定小鼠免疫后的抗体水平以及猪免疫后P1合成多肽抗原对外周血淋巴细胞的刺激增殖情况.结果表明,设计合成表达的PCV2 P1多肽抗原序列,密码子适应性指数为0.89,能够实现高水平表达,目的片段大小约为28.29 ku,具有良好的免疫原性;MTT试验结果表明,P1多肽抗原免疫后机体内IFN-γ和IL-4的表达量明显增加,且与对照组差异显著(P＜0.05).这说明P1能够诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应,为其作为疫苗用抗原的进一步研究奠定了理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王贵平		39	107	5.0	7.0
2	李中圣		21	53	4.0	5.0
3	陈善真		17	20	3.0	3.0
4	陈克宏		6	10	2.0	2.0
5	李其昌		12	20	3.0	3.0
6	罗均		2	3	1.0	1.0
7	赵焱		1	3	1.0	1.0