MiR-145对人结肠癌细胞株HCT-116奥沙利铂耐药机制探讨

• 作者: 付强 张永磊 成静 罗素霞 谢建国 陈小兵
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结肠肿瘤 microRNA-145 HCT-116细胞 耐药 奥沙利铂 印迹法,蛋白质
• 年，卷（期）: 2015,（19）
• 所属期刊栏目: 实验研究/论著
• 页码范围: 1523-1527
• 分类号: R735.35
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨microRNA 145 (miR 145)对人结肠癌细胞株HCT-116奥沙利铂(L-OHP)耐药作用及其机制.方法 采用逐步增加药物浓度的方法,建立人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT-116/L-OHP.脂质体转染法将miR-145转入建立好的耐药细胞株中,并设立阴性miRNA对照组、miR-145 siRNA处理组(miR-145组)、空脂质体组和空白对照组(control组).MTT法测定转染48 h后细胞增殖能力和对L-OHP的敏感性;实时定量PCR检测转染后HCT-116/L-OHP细胞中多药耐药基因MDR1和抑癌基因PTEN的表达;蛋白质印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)和PTEN蛋白表达.结果 成功建立耐药倍数为母本细胞7倍的HCT-116 /L-OHP细胞株.检测HCT-116母本与HCT-116/L-OHP细胞MDR1、PTEN基因表达结果显示,HCT-116/L-OHP细胞MDR1基因水平为0.86±0.05,较母本细胞的0.39±0.03显著升高;HCT-116/L-OHP细胞PTEN基因水平为0.41±0.04,较母本细胞的0.89±0.02显著下调.应用miR-145转染母本及耐药细胞发现,miR-145可明显抑制HCT-116母本及HCT-116/L-OHP细胞的增殖,生长抑制率分别为57％和38％,进而提高细胞对L-OHP的药物敏感性.进一步研究发现,miR-145过表达处理后,抑癌基因PTEN表达水平为0.78±0.03,较control组的0.42±0.01显著上调;而MDR1基因表达水平为0.47±0.01,较control组的0.87±0.02显著下调.经miR-145 siRNA预处理后,HCT-116/L-OHP细胞抑癌基因PTEN表达水平为0.35±0.02,较miR-145组显著下降;而MDR1基因表达水平为0.94±0,04,较miR 145组显著上调;PTEN蛋白及MDR1目的蛋白P-gp的变化呈现相同趋势,P值均＜0.05.结论 miR-145可降低人结肠癌HCT-116细胞株奥沙利铂耐药性,其作用机制可能是通过影响MDR1和PTEN基因及蛋白表达水平来实现的.