DKK1-siRNA 真核表达载体的构建及其对骨质疏松大鼠治疗作用的研究

• 作者: 刘媛 剧锦哲 吕凤凤 庞春艳 张伟 武剑 王永福
• 来源期刊: 中国骨质疏松杂志
• 学科: 医学
• 关键词: DKK1基因 小干扰RNA 骨质疏松症
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 页码范围: 125-131,151
• 页数: 8页
• 分类号: R593.9
• 字数: 4757字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7108.2015.02.001

摘要

目的：针对DKK1基因构建两段小干扰RNA（ siRNA）真核表达载体，观察其对骨质疏松（ OP）大鼠的治疗作用。方法12周龄Wistar雌性大鼠随机分为5组，对照组、模型组、空载体组、DKK1－siRNA1组及DKK1－siRNA2组，每组10只。对照组肌注生理盐水，其他组肌注地塞米松造模，连续12 w，鉴定骨质疏松模型是否构建成功。构建两段DKK1－siRNA 真核表达载体，尾静脉注射治疗组大鼠，对照组和模型组注射等体积PBS，空载体组注射等体积空载体。骨切片观察载体是否靶向到骨，RT－PCR检测股骨DKK1 mRNA的表达，免疫组化法检测股骨DKK1蛋白的表达水平。 ELISA检测血清中骨碱性磷酸酶（ BALP ）、Ⅰ型胶原蛋白（Col－Ⅰ）和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的水平；测定股骨骨密度及病理结构变化。结果（1）双酶切和基因测序鉴定结果表明siRNA真核表达载体构建成功；（2）模型组、空载体组及治疗组大鼠造模后，近端股骨骨密度较对照组明显降低（P＜0．05）；病理改变为骨小梁数目明显减少、断裂，而对照组骨小梁结构较完整；（3）DKK1－siRNA质粒载体靶向到骨；（4）治疗组大鼠血DKK1－mRNA及股骨DKK1蛋白的表达明显下降；（5）与模型组和空载体组相比，治疗组血清中BALP与Col－Ⅰ水平明显升高， TRAP水平明显下降（ P＜0．05）；（6）治疗后各组大鼠近端股骨骨密度的差异无统计学意义（ P＞0．05）；（7）治疗组大鼠股骨有新生骨小梁形成，骨小梁破坏减轻。结论 DKK1－siRNA促进骨形成，抑制骨吸收，减轻骨结构的破坏。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘媛	包头医学院第一附属医院风湿免疫科	18	116	5.0	9.0
2	庞春艳	包头医学院第一附属医院风湿免疫科	18	69	4.0	7.0
3	张伟	包头医学院第一附属医院风湿免疫科	24	76	4.0	6.0
4	吕凤凤	包头医学院第一附属医院风湿免疫科	4	12	2.0	3.0
5	剧锦哲	包头医学院第一附属医院风湿免疫科	1	4	1.0	1.0
6	武剑	包头医学院第一附属医院风湿免疫科	1	4	1.0	1.0