表达水泡性口炎病毒双血清型G蛋白重组腺病毒的构建及对小鼠的免疫原性分析

• 作者: Zheney Makay 李刚 薛晓娟 赵玲娜 金红岩 隋修锟
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: VSV G蛋白 重组腺病毒 免疫反应 小鼠
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 2227-2234
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 5723字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.12.014

摘要

旨在以人5型复制缺陷型腺病毒为表达载体,构建表达水泡性口炎病毒(VSV)双血清型G蛋白的重组腺病毒.利用融合PCR技术扩增VSV-IN-G-NJ-G基因并将其克隆至腺病毒穿梭载体pacAd-CMV K-NpA中.通过Pac I酶线性化后,与同样经Pac Ⅰ酶线性化的骨架载体pacAd5 9.2-100共转染AAV-293细胞,获得重组腺病毒rAd-VSV-IN-G-NJ-G.该重组腺病毒于AAV-293细胞连续传代至20代效价稳定.经间接免疫荧光和Western blot检测,G蛋白获得正确表达.将重组腺病毒接种小鼠,利用间接ELISA及病毒中和试验检测其体液免疫水平,结果显示可诱导产生VSV特异性抗体,其中和抗体水平在1∶ 32;利用淋巴细胞增殖试验检测细胞免疫水平,结果表明可以引起接种小鼠强烈的淋巴细胞增殖.构建的重组腺病毒免疫小鼠后可以引起一定的体液免疫和细胞免疫反应,为表达VSV糖蛋白重组腺病毒疫苗的深入研究奠定了基础.