豹蛙抗瘤酶与人血清白蛋白融合蛋白的毕赤酵母高效表达与活性测定

• 作者: 丁一 史世会 吕中原 崔晴晴 张全义 张继红 徐存拴 杨刚刚 王泽 王绪洋 许晓亚 马诚凯
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 豹蛙抗瘤酶 人血清蛋白 毕赤酵母高效表达 双水相萃取 癌细胞活性
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 222-229
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.10.034

摘要

豹蛙抗瘤酶（Onconase，ONC），又称豹蛙酶，对多种肿瘤细胞和实体瘤具有显著杀伤作用，为得到高表达的ONC，利用HSA在毕赤酵母系统中的表达优势，将HSA和ONC融合进行毕赤酵母表达并分离纯化。设计融合基因HSA-（Gly4Ser1）3-ONC，简称HSA-ONC，构建至3种表达载体pPIC9、pPIC9K、pPICZα-A并分别转染X-33、GS115和SMD11683种宿主菌，在摇瓶和10 L规模优化表达条件和双水相偶联柱层析分离纯化目的蛋白并测定其生物学活性。结果显示，在1 L摇瓶规模下，pPICZα-A/X-33/HSA-ONC组合的表达量优于其他组合，且在pH7，温度23℃条件下诱导10 d，表达量达到最高（235 mg/L）。在10 L规模进行不同培养基条件的发酵，rHSA-ONC于pH 7的低盐基础盐培养基（Low salt basic salt medium，LS-BSM），甲醇浓度0.25%条件下诱导10 d，表达量达到最高（2.02 g/L）。经双水相萃取偶联DEAE离子交换层析可得到纯度≥95%、收率高于70%的rHSA-ONC。生物活性检测发现，rHSA-ONC在体外能抑制多种癌细胞增殖。rHSA-ONC的表达量较rONC提高1倍（同等摩尔量情况下），同时在体外抑制多种癌细胞增殖。