小脑颗粒神经元细胞凋亡中caspase-8基因变化与二乙酰吗啡的影响

• 作者: 刘小山 张丽萍 李凯超 王华 王治国 王雪梅 苏丽萍 蒲红伟 陈晓
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 组织工程 二乙酰吗啡 小脑颗粒神经元 凋亡 半胱天冬氨酸蛋白酶8(caspase-8) HSLE JNK 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 页码范围: 213-219
• 页数: 7页
• 分类号: R318
• 字数: 7603字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.02.010

摘要

背景：半胱-天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)是细胞凋亡过程起始的重要因子，二乙酰吗啡可致神经元细胞凋亡，其与二乙酰吗啡致小脑颗粒神经元细胞凋亡之间关系尚未见报道。目的：验证二乙酰吗啡诱导小脑颗粒神经元细胞凋亡与caspase-8基因表达情况，明确caspase-8参与二乙酰吗啡致神经元凋亡过程。方法：取出生7 d SD大鼠小脑颗粒神经元细胞进行体外培养，第7天后，以不同质量浓度的二乙酰吗啡(10，40，80，100，120 mg/L)和C-jun氨基末端激酶通路特异性抑制剂SP600125作用小脑颗粒神经元细胞24 h，并分对照组(0 mg/L二乙酰吗啡)，80 mg/L二乙酰吗啡组，二乙酰吗啡+SP 600125组；采用Hoechst 33258荧光染色观察细胞形态学改变，流式细胞仪测细胞凋亡率，免疫荧光、RT-PCR及Western Blotting检测caspase-8 mRNA和蛋白表达情况。结果与结论：①施加不同质量浓度二乙酰吗啡致神经元细胞凋亡，凋亡细胞出现透亮深蓝色的凋亡小体，细胞核呈现固缩、凝聚及断裂，随给药浓度增加细胞凋亡率呈现升高趋势(P<0.05)。②与对照组相比，在80 mg/L二乙酰吗啡干预时caspase-8 mRNA和蛋白表达明显明显表达(P<0.05)；caspase-8 mRNA随给药浓度增加呈现升高趋势(P<0.05)，二乙酰吗啡+SP600125组中caspase-8 mRNA和蛋白较80 mg/L二乙酰吗啡组明显下调(P<0.05)。结果提示caspase-8参与二乙酰吗啡致小脑颗粒神经元细胞凋亡过程，同时也是C-jun氨基末端激酶信号通路中的重要候选促凋亡因子。