奶牛GPR109A基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 何宝祥 尹南男 左宗辉 杜向宏 杜玉兰 杨蓉 赵熠珩 陈亚明
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 奶牛 GPR109A基因 β-actin基因 特异性 敏感性 重复性 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 512-517
• 页数: 6页
• 分类号: S823.91
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2015.3.512

摘要

[目的]建立奶牛G蛋白偶联受体109A基因(GPR 109A)的实时荧光定量PCR检测方法,为开展奶牛产后脂类代谢紊乱及酮病发生机理研究奠定基础.[方法]根据GenBank中奶牛GPR 109A基因和卢-actin基因(内参基因)的mRNA保守序列设计合成两对引物,以奶牛肝脏组织cDNA为模板,PCR扩增目的基因后与载体连接构建重组质粒,以SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR进行扩增,绘制标准曲线,并对其特异性、敏感性、重复性等进行检验.[结果]GPR109A基因和β-actin基因的实时荧光定量PCR标准曲线方程分别为y=-3.309x+10.92(R2=0.9985)和y=-3.289x+9.794(R2 2=0.9997),扩增效率分别为101.0％和100.0％.特异性试验结果显示,GPR 109A基因和β-actin基因的溶解曲线峰单一,无引物二聚体和非特异性扩增产物生成;敏感性试验结果显示,线性扩增范围广,可检测到1.8×102个拷贝的GPR109A基因;重复性试验结果显示,各扩增反应的变异系数(CV)小于或等于1.7％.[结论]基于GPR109A基因建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR具有操作简便、敏感性高、特异性强和重复性好等特点,可用于牛源性GPR109A基因表达量的快速检测和定量分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何宝祥	广西大学动物科学技术学院	109	427	10.0	14.0
2	杜玉兰	广西大学动物科学技术学院	51	284	9.0	15.0
3	杜向宏	广西大学动物科学技术学院	9	34	4.0	5.0
4	尹南男	广西大学动物科学技术学院	1	1	1.0	1.0
5	左宗辉	广西大学动物科学技术学院	4	5	1.0	1.0
6	杨蓉	广西大学动物科学技术学院	11	13	2.0	2.0
7	赵熠珩	广西大学动物科学技术学院	1	1	1.0	1.0
8	陈亚明	广西大学动物科学技术学院	5	17	3.0	4.0