金黄色葡萄球菌基因敲除质粒的构建及应用

• 作者: 卫玮 李晓玲 袁文常
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 实验动物 组织工程 金黄色葡萄球菌 甲氧西林 毒力 耐药性 质粒 基因敲除 同源重组 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 页码范围: 799-804
• 页数: 6页
• 分类号: R318
• 字数: 6038字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.05.025

摘要

背景：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌已经成为全球院内感染的首要致病菌，建立快速简单的基因敲除方法是研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力、耐药性的重要技术。<br>　　目的：构建适用于金黄色葡萄球菌基因敲除的质粒，用于金葡菌耐药性及毒力的研究。<br>　　方法：以pUC19为构建的基本骨架，通过overlap PCR的技术手段，把pCL52.1中pLE194Ts温敏复制子及质粒pHY300PLK中四环素抗性基因片段，通过高保证扩增后，连接入pUC19的EcoRⅠ位点，保留pUC19中所有的多克隆位点，构建大肠杆菌-金黄色葡萄球菌穿梭质粒，并对金黄色葡萄球菌N315 dapB基因进行敲除，通过多重PCR对基因敲除菌株进行鉴定。<br>　　结果与结论：成功构建了大肠杆菌-金黄色葡萄球菌穿梭质粒pYZ1和pYZ8，并用于金葡菌基因的敲除，通过酶切及overlap技术构建了同源重组质粒pYZ-ΔdapB，电转入RN4220进行修饰后，再电转入N315，通过温度筛选，获得了dapB基因突变菌株，成功的敲除了dapB基因。提示pYZ1和pYZ8能够成功用于金黄色葡萄球菌耐药菌株基因的敲除，为进一步研究临床金黄色葡萄球菌分离株耐药性及毒力提供了工具。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李晓玲	解放军兰州军区乌鲁木齐总医院临床检验诊断中心	2	3	1.0	1.0
2	袁文常	解放军兰州军区乌鲁木齐总医院临床检验诊断中心	4	5	1.0	1.0
3	卫玮	解放军兰州军区乌鲁木齐总医院临床检验诊断中心	1	1	1.0	1.0