RHDV VLPs单克隆抗体的制备及其识别表位的初步定位

• 作者: 宋艳华 彭伟 徐为中 王芳 胡波 范志宇 薛家宾 魏后军
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: RHDV VLPs 单克隆抗体 表位 初步定位
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 页码范围: 65-70
• 页数: 6页
• 分类号: S858.2912.65
• 字数: 4560字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2015.05.011

摘要

为了筛选兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(vP60)的特异性单抗,并进一步分析单抗识别表位的分布情况,将重组杆状病毒rAcV-Bac-VP60接种Sf9昆虫细胞,收获细胞培养物,电镜观察显示重组VP60蛋白获得有效表达,并可组装成病毒样粒子(VLPs).将RHDV VLPs作为免疫原与等量弗氏佐剂乳化,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经3次亚克隆后,获得11株能稳定分泌抗RHDV VLPs抗体的阳性杂交瘤细胞株.间接ELISA、IFA和Western Blot鉴定结果表明,这11株单克隆抗体均能够特异地识别RHDV VLPs和天然RHDV.11株单抗均为IgG1,其中1D4和3F7的轻链为Lambda型,其余均为Kappa型.截短表达结果显示,单抗5A3针对RHDV VP60的NTA区,5F3针对RHDV VP60的S区,单抗1B8、1 D4、3D11、3F7、4C2、4G2、5G2、5H3和6B2针对RHDV VP60的P区.研究为RHDV VLPs抗原表位的鉴定和RHDV结构功能的研究奠定了基础,同时为RHDV的检测和新型疫苗研究提供物质基础.