敏捷食酸菌腈水解酶基因在大肠杆菌中的表达

• 作者: 姜岷 宫长斌 管启旺 贺爱永 马江锋
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 腈水解酶 敏捷食酸菌 大肠杆菌 克隆
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 181-185
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.01.027

摘要

以含有敏捷食酸菌的腈水解酶基因的克隆质粒为模板，通过PCR扩增获得长度为1080 bp的腈水解酶（Nitrilase）基因片段。使用表达质粒pET-28-a构建表达载体，获得重组质粒pET-Nit。对所表达的基因进行测序对比发现与GenBank所公布的基因序列比较，相似性99%，读码框出现2 bp的突变，但并未引起相应氨基酸突变，故不影响酶的表达与特性。将重组质粒转化到表达宿主Escherichia coli Rosetta（DE3）感受态中，使用诱导剂IPTG对菌株进行诱导表达，获取菌液进行SDS-PAGE分析，得知目的蛋白分子量约为41.28 kD，与预期所想的一致。酶活力分析表明，上清的比活力为3 U/mg。进一步对诱导条件进行优化，包括诱导温度，IPTG浓度，诱导时间等一系列条件。在最优条件下，扩大培养体积，比活力可达15 U/mg，活力提高了5倍左右。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜岷	南京工业大学生物与制药工程学院材料与化学工程国家重点实验室	110	901	15.0	22.0
2	马江锋	南京工业大学生物与制药工程学院材料与化学工程国家重点实验室	26	133	7.0	10.0
3	贺爱永	南京工业大学生物与制药工程学院材料与化学工程国家重点实验室	6	22	2.0	4.0
4	管启旺	南京工业大学生物与制药工程学院材料与化学工程国家重点实验室	1	2	1.0	1.0
5	宫长斌	南京工业大学生物与制药工程学院材料与化学工程国家重点实验室	2	14	2.0	2.0