重组内肽酶AspN的原核表达纯化和活性鉴定

• 作者: 张大鹏 李晶 段树燕 王皓 赵自叶 郑娟 郭尚敬 郭怀祖
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 重组内肽酶AspN 原核表达 纯化 活性鉴定
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 186-192
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.01.028

摘要

蛋白内肽酶AspN是一种锌金属内切肽酶，能选择性切割天冬氨酸的N端肽键，广泛应用于蛋白的多肽制备及质量肽图谱鉴定。目前内肽酶AspN来源于细菌分泌，产量低，制备困难，成本高，极大地限制了该酶的应用。将脑膜脓毒性黄杆菌分泌的蛋白内肽酶AspN所对应的基因克隆入表达载体pET32a，导入E.coli BL21（DE3），首次运用原核表达系统进行可溶性融合表达，亲和层析对重组蛋白进行纯化。用HPLC、SDS-PAGE和荧光底物Anthranilyl-Ala-Phe-Ala-Phe-Asp-Val-Phe（NO2）-Tyr-Asp对重组酶进行酶活鉴定。结果表明重组的内肽酶AspN具有与标准品基本一致的酶切活性，能够较好地应用于生物和制药领域。