毛白杨酵母单杂交体系的建立

• 作者: 刘蕾 张强 李丽红 胡旭东 蒋璐瑶 要笑云 陆海
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 毛白杨 酵母单杂交体系 载体构建 文库构建
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 370-375
• 页数: 6页
• 分类号: S792.117
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2015.3.370

摘要

[目的]通过建立酵母单杂交文库筛选出与毛白杨特异性调控元件结合的候选蛋白,为研究毛白杨木材合成相关基因奠定基础.[方法]采用模板基因PCR方法,分别将ABRE-box、AC-box及-317-Box三次重复序列连接至pAbAi诱饵质粒上,再将诱饵载体转入酵母中;使用磁珠法获得mRNA,采用SMART技术合成cDNA,以cDNA为模板进行LD-PCR并将产物纯化后与pGADT7-Rec载体共转化诱饵酵母,同时进行文库的构建与筛选.[结果]以pBI121质粒为模板扩增获得的ABRE/AC/-317-GUS片段约为650 bp.以Kpn I对重组质粒pAbAi-ABRE/AC/-317-GUS进行单酶切,获得约5000 bp的大片段与650 bp的小片段;测序结果表明,插入序列与ABRE/AC/-317序列一致且方向正确.在SD/Ura培养基中,当AbA为100 ng/mL时,酵母菌落数为0,建库时AbA为100 ng/mL.cDNA与pGADT7载体共转化的酵母Y 1HGold(pAC-AbAi)细胞稀释100倍后,在SD/-Leu培养基上长出89个克隆,含AC-box的诱饵酵母所建库容量为1.3×106,且无rRNA污染.酵母转化产物在SD/-Leu/AbA(100 ng/mL)培养基上长出18个克隆,大于250 bp的有13个克隆;测序和同源分析结果表明,成功筛选到5个候选蛋白,主要是蛋白激酶、核小体蛋白及功能未知蛋白,这些蛋白可作为与AC元件结合的候选蛋白.[结论]建立的毛白杨酵母单杂体系可用于进一步筛选与木材合成相关的基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆海	北京林业大学生物科学与技术学院	69	729	14.0	24.0
2	张强	北京林业大学生物科学与技术学院	29	354	10.0	18.0
3	蒋璐瑶	北京林业大学生物科学与技术学院	4	6	2.0	2.0
4	李丽红	北京林业大学生物科学与技术学院	6	11	2.0	3.0
5	要笑云	北京林业大学生物科学与技术学院	5	6	2.0	2.0
6	刘蕾	北京林业大学生物科学与技术学院	3	29	3.0	3.0
7	胡旭东	北京林业大学生物科学与技术学院	1	4	1.0	1.0