脑心肌炎病毒VP1蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及验证

• 作者: 侯兰新 冯若飞 张海霞 徐雷 李向茸 谢晶莹 马忠仁
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 脑心肌炎病毒 VP1蛋白 酵母双杂交 诱饵蛋白
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 198-202
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.01.030

摘要

为筛选与脑心肌炎病毒VP1蛋白相互作用的靶细胞cDNA文库蛋白，构建VP1蛋白的诱饵载体pDHB1-VP1。扩增EMCV的VP1基因并克隆至pMD18-T载体中，经测序验证正确后定向克隆至酵母双杂交诱饵载体pDHB1。将重组pDHB1-VP1载体进行酶切验证和测序分析，并转化酵母报告菌株NMY51，检测其在酵母细胞中有无表达和自激活作用。结果表明，构建的pDHB1-VP1基因可以在酵母细胞中正确表达，产物大小约66 kD，而且可以与兔抗EMCV血清发生特异性结合，有较好免疫原性。成功构建了诱饵载体pDHB1-VP1，可以在酵母细胞中表达且其对报告基因无自激活作用，可以应用于酵母双杂交筛选试验中。