高浓度酶快速胶内酶解技术用于磷酸化蛋白质组学分析

• 作者: 刘芳洁 叶明亮 潘彦博 邹汉法
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 高浓度酶 胶内酶解 磷酸化蛋白质组学
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 特约来稿
• 页码范围: 1452-1458
• 页数: 7页
• 字数: 5103字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11895/j.issn.0253-3820.140820

摘要

聚丙烯酰胺凝胶电泳是一项高效的蛋白质分离技术,通过与质谱技术联用,可以鉴定成千上万的蛋白质点.但是,复杂繁琐的操作流程限制了它在蛋白质组学研究方面的广泛应用.本研究表明,高浓度的胰蛋白酶并不会影响胶内酶解后磷酸化肽段的富集,反而可以实现快速高效的蛋白酶解,据此建立了一种快捷、高效的蛋白质酶解方法.首先,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,对50μg复杂蛋白样品进行分离,分成5个组分;然后,选择高浓度胰蛋白酶酶解30 min;最后,运用固定钛离子亲和色谱小柱离心法富集磷酸化肽段.经液相色谱-串联质谱分析,成功鉴定到约2000个磷酸化位点,而传统方法则只鉴定到不足1500个位点.实验表明,在高浓度胰蛋白酶的促进作用下,胶内酶解过程在0.5h内即可以完成,并且得到比对照组更高的磷酸化位点的鉴定量和更低的酶解漏切率,而传统方法需要16 h.这也证实了本方法不仅可以加速酶解反应,同时还能提高蛋白酶解效率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹汉法	中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室	68	957	20.0	28.0
2	叶明亮	中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室	20	82	5.0	8.0
3	刘芳洁	中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室	1	1	1.0	1.0
7	潘彦博	中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室	1	1	1.0	1.0