MEF2C基因RNA干扰质粒的构建及干扰效率测定

• 作者: 曾阳阳 朱弘焱 田玉民 苏玉虹
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 生物学
• 关键词: MEF2C C2C12 重组质粒 转染
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 31-35
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3326字
• 语种: 中文

摘要

为了构建猪MEF2C基因的RNA干扰重组质粒,并筛选出最佳干扰效率的序列,本试验采用RNAi技术,设计并合成了3条针对猪MEF2C基因的RNA干扰序列,构建了RNA干扰重组质粒(命名为siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3),将其转染到小鼠C2C12细胞,并用实时定量PCR检测细胞中MEF2C基因mRNA的表达,Western blot测定细胞中MEF2C基因蛋白的表达.结果表明:重组质粒经PCR扩增后显示产物大小与预期一致,产物经双酶切及测序鉴定该序列与NCBI提供的序列一致.重组质粒转染C2C12细胞后,MEF2C基因mRNA表达受到不同程度抑制,抑制率分别为(33.67±2.51)％、(21.00±3.60)％、(71.67±4.04)％.Western blot结果表明MEF2C基因蛋白表达受到不同程度抑制,抑制率分别为(47.33±0.05)％、(38.25±0.16)％、(67.27±0.12)％.本试验成功构建猪MEF2C基因干扰重组质粒,最终确定干扰质粒(siRNA-3)具有最佳干扰效果,证实MEF2C基因的干扰质粒能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为探讨该基因与肌肉肉质性状的关系提供理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田玉民	辽宁医学院畜牧兽医学院	50	94	5.0	6.0
2	苏玉虹	辽宁医学院畜牧兽医学院	112	408	10.0	14.0
3	朱弘焱	辽宁医学院畜牧兽医学院	25	46	3.0	5.0
4	曾阳阳	辽宁医学院畜牧兽医学院	2	4	1.0	2.0