鸡柔嫩艾美耳球虫HN株3-1E基因的原核表达与鉴定

• 作者: 刘海隆 张艳 曹宗喜 林哲敏 谭树义
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 海南株 3-1E基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 33-37
• 页数: 5页
• 分类号: S858.31
• 字数: 3537字
• 语种: 中文

摘要

根据已报道的柔嫩艾美耳球虫3-1E基因序列设计引物,以孢子化卵囊总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增得到1条特异片段,将扩增产物克隆至pMD-18T载体,转化感受态菌JM109,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序.测序结果与已发表的国内外相关虫株的3-1E基因序列比较,核苷酸的同源性均在99.2％～ 99.8％,氨基酸的同源性均在98.2％ ～ 100％.然后将重组质粒和表达载体pGEX-4T-1分别用XhoⅠ和EcoR Ⅰ酶切后构建重组表达载体pGEX-3-1E,并将其转化入大肠杆菌BL21中,提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后,用IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测显示,3-1E基因在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白的分子量为44.7 ku,诱导表达5h的蛋白表达量可达到30％以上.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林哲敏	海南省农业科学院畜牧兽医研究所	12	50	4.0	6.0
3	张艳	海南省农业科学院畜牧兽医研究所	42	74	3.0	5.0
7	刘海隆	海南省农业科学院畜牧兽医研究所	54	93	5.0	7.0
10	曹宗喜	海南省农业科学院畜牧兽医研究所	28	50	3.0	5.0