重组枯草芽孢杆菌分泌表达腺苷酸脱氨酶

• 作者: 丁重阳 张梁 李由然 李赢 石贵阳 郭自涛 顾正华
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺苷酸脱氨酶 鼠灰链霉菌 枯草芽孢杆菌 重组表达
• 年，卷（期）: 2015,（21）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 135-139
• 页数: 5页
• 分类号: Q815
• 字数: 4089字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201521026

摘要

目的:利用基因重组技术,构建腺苷酸脱氨酶高效表达的重组菌株.方法:以前期构建的产腺苷酸脱氨酶重组大肠杆菌BL21 (DE3) /pET28α-AMPD中来源于鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)目的基因为模板,设计特异性引物扩增腺苷酸脱氨酶基因,亚克隆至游离型表达载体pHY-WZX,转化枯草芽孢杆菌WB600.结果:成功筛选获得了一株产腺苷酸脱氨酶重组枯草芽孢杆菌WB600/pHY-AMPD,进一步在摇瓶中探究了发酵培养基成分对重组酶发酵的影响.获得了较优发酵培养基为:葡萄糖10 g/L、酵母膏30 g/L、CaCl20.5 g/L、柠檬酸三钠1 g/L、NaH2PO410 g/L、K2HPO4 10 g/L、(NH4)2SO45 g/L,37℃、200 r/min发酵60 h摇瓶发酵液酶活力可达到(2 230±50) U/mL.结论:本研究实现了鼠灰链霉菌来源的腺苷酸脱氨酶基因在枯草芽孢杆菌中表达.