LV3-KiSS1-miRNA 的构建及其在体内外沉默效应观察

• 作者: 李嫔 董红
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 性发育 KiSS1基因 基因干扰技术 微小核糖核酸 慢病毒载体 大鼠
• 年，卷（期）: 2015,（24）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 28-30
• 页数: 3页
• 分类号: R725.8
• 字数: 2097字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2015.24.010

摘要

目的：构建靶向KiSS1基因的miRNA慢病毒质粒（LV3-KiSS1-miRNA），并观察其在人胚肾293T细胞及SD大鼠体内的沉默效应。方法利用四质粒系统合成LV3-KiSS1-miRNA，分别用LV3-KiSS1-miRNA （观察组）、LV3-N-miRNA （对照病毒组）、细胞培养液（空白对照组）与 KiSS1的真核表达载体pcDNA3．1（＋）-KiSS1共转染293T细胞，72 h后采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（ GFP）阳性表达率，RT-PCR法检测细胞中的KiSS1 mRNA。将90只21日龄SD大鼠随机分为3组各30只，分别侧脑室注射LV3-KiSS1-miRNA（干扰病毒组）、LV3-N-miRNA （对照病毒组）和生理盐水（生理盐水组）40μL，采用RT-PCT法检测30、35、45日龄时大鼠下丘脑组织中的KiSS1 mRNA。结果空白对照组中无GFP表达，而观察组与对照病毒组的GFP表达率分别为89．4％、94．2％。观察组与对照病毒组、空白对照组比较KiSS1 mRNA表达量减少（P均＜0．01），沉默效率达到86％；对照病毒组与空白对照组比较，P＞0．05。干扰病毒组大鼠各日龄时下丘脑组织中KiSS1 mRNA表达水平明显低于生理盐水组和对照病毒组（P均＜0．05）。结论成功构建LV3-KiSS1-miRNA，并能高效、稳定地抑制293T细胞及SD大鼠下丘脑组织中KiSS1 miRNA的表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李嫔		30	116	6.0	10.0
2	董红		13	17	2.0	3.0