pVLT-EGFP载体构建及其在巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)的表达研究

• 作者: 刘莉 刘莹莹 岳丹丹 巩涛 李冠杰 杨文玲 王继雯 甄静 陈国参
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 巴西固氮螺菌 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 表达载体 实时荧光定量PCR(qPCR)
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 96-101
• 分类号: Q939.96
• 语种: 中文

摘要

为了研究巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)在植物体内的定殖,利用酶切连接的方法,以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因与表达栽体pVLT-33为基本元件,构建了重组表达载体pVLT-EGFP,电转巴西固氮螺菌R7细胞,并利用实时荧光定量PCR(qPCR)研究了不同温度、不同时间EGFP mRNA的表达情况.酶切及测序结果表明,成功构建了pVLT-EGFP载体,并在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达;qPCR结果显示:30℃,诱导9hEGFP基因的表达水平最高.本研究成功构建了重组表达载体pVLT-EGFP,为实现pVLT-EGFP的可控表达及研究固氮菌在植物体内的定殖规律及促生长机理提供了一种有效的途径.