β-葡萄糖醛酸苷酶键选择性高效筛选体系的构建与应用

• 作者: 冯旭东 吕波 李春
• 来源期刊: 化工学报
• 关键词: β-葡萄糖醛酸苷酶 生物催化 分子生物学 优化设计 键选择性
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 生物化学工程与技术
• 页码范围: 3189-3194
• 页数: 6页
• 分类号: Q816
• 语种: 中文
• DOI: 10.11949/j.issn.0438-1157.20150788

摘要

分子改造是提高β-葡萄糖醛酸苷酶（PGUS-E）在生产单葡萄糖醛酸基甘草次酸（GAMG）过程中的键选择性的有效方法，但高通量筛选方法的缺失是限制其发展的重要瓶颈。为解决该问题，在大肠杆菌中构建了组成型表达β-葡萄糖醛酸苷酶（PGUS-E），利用温度诱导表达噬菌体裂解酶SRRz实现原位裂解的一锅法（one-pot）甘草酸键选择性筛选体系（CELS）；同时考察了启动子强度对PGUS-E外源表达的效果，优化了不同温度下裂解酶 SRRz 的表达对酶释放效率的影响。结果表明，CELS 筛选体系成功实现了集培养、产酶、裂解和反应于一体化工艺，并将其应用于PGUS-E的非理性改造，获得了一系列键选择性显著提高的突变酶。研究证明，TIM 桶状结构域中α螺旋结构的变化对甘草酸键选择性的改善有很大的影响。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕波	北京理工大学生命学院生物工程系	18	104	6.0	10.0
2	李春	北京理工大学生命学院生物工程系	106	629	13.0	20.0
3	冯旭东	北京理工大学生命学院生物工程系	13	36	3.0	5.0