人细支气管上皮细胞的ROCK激酶抑制剂培养体系扩增及气液相模型的建立

• 作者: 何进喜 刘晓明 孙颖飞 李勇 杨佳丽 贾元元 韩飞
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 培养 人细支气管上皮细胞 肺脏 ROCK激酶抑制剂 气液相培养 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2015,（28）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 干细胞培养与分化
• 页码范围: 4582-4587
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6046字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.28.028

摘要

背景：人类原代肺脏上皮细胞在体外难以分离培养，表现为组织来源有限、细胞存活率低、增殖速度慢，缺乏上皮细胞表型分化能力等。<br>　　目的：体外扩增人细支气管上皮细胞，建立其气液相分化模型，用于肺脏上皮细胞功能研究。<br>　　方法：采用Pronase和DnaseⅠ联合消化法分离人细支气管上皮细胞。利用ROCK激酶抑制剂培养体系对其进行扩增，免疫荧光染色鉴定细胞类型。建立气液相培养模型，扫描电镜、相差显微镜和免疫荧光染色鉴定细胞分化类型。<br>　　结果与结论：通过 ROCK 激酶抑制剂培养体系，体外成功培养扩增了人细支气管上皮细胞。扩增细胞经免疫荧光染色鉴定绝大部分都表达基底细胞标记角质蛋白14，提示人细支气管的基底细胞可能是肺脏上皮干细胞的主要亚群。同时，扩增细胞在气液相培养条件下分化成纤毛细胞和无纤毛柱状细胞，表明ROCK激酶抑制剂培养体系扩增的上皮细胞仍然保持干细胞的增殖分化能力，体外气液相培养模型可以促进人细支气管上皮细胞分化。