H7N9亚型禽流感病毒血凝素蛋白的真核表达及抗原性的鉴定

• 作者: 刘浩 杨咪 校海霞 郭天玲
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 H7N9 血凝素蛋白 293T细胞 Western blot ELISA
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 16-19
• 页数: 4页
• 分类号: S852.5
• 字数: 2849字
• 语种: 中文

摘要

目的:通过哺乳动物细胞表达出禽源H7 N9流感表面HA蛋白,并鉴定其抗原性.方法:通过引物设计,利用融合PCR方法扩增得到H7N9禽流感HA基因,以pCAGGS为表达载体构建重组质粒pCAGGS-H7-thrombin.测序正确后将重组质粒转染293T细胞.经72 h后收获上清,通过镍柱和凝胶层析柱纯化后得到目的蛋白.Western blot和ELISA结果鉴定纯化的H7蛋白的抗原性.结果:293T细胞表达的上清经HisTrapTMHP纯化后过Superdex 200 10/300 GL分子筛,在洗脱体积达到11 mL左右出峰,由出峰位置判断其为H7三聚体.Western blot检测在60 ku左右有一条阳性条带,ELISA检测其对抗H7 N9小鼠阳性血清有很高的反应值.试验成功表达禽流感病毒H7 N9的H7蛋白,并且针对H7 N9的阳性血清有较高的灵敏性,为进一步研究H7N9亚单位疫苗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	校海霞	中国科学院天津工业生物技术研究所	9	49	3.0	7.0
2	刘浩	天津科技大学生物工程学院	10	17	3.0	3.0
3	郭天玲	天津科技大学生物工程学院	1	3	1.0	1.0
7	杨咪	中国科学院天津工业生物技术研究所	1	3	1.0	1.0