红花转录因子CtMYB1基因的克隆及原核表达

• 作者: 官丽莉 张雪 朱栋 李校堃 李海燕 杜林娜 杨晶 王法微 韩怡来
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 红花 MYB CtMYB1 原核表达 红花黄色素 RT-PCR RACE
• 年，卷（期）: 2015,（17）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 2603-2609
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.17.017

摘要

目的 从红花Carthamus tinctorius花瓣中克隆转录因子基因CtMYB1,并进行序列分析和原核表达载体的构建.方法 根据红花转录组测序结果中得到的高表达的Unigene123933序列,利用RT-PCR和RACE技术从红花花瓣中扩增得到CtMYB1基因的全长eDNA序列,并进行生物信息学分析;以CtMYB1基因的全长cDNA序列为模板,PCR扩增得到CtMYB1基因的开放阅读框(ORF)序列,构建原核表达载体pEASY-E1-CtMYB1.转化大肠杆菌BL21 (DE3)进行诱导表达.结果 成功从红花中克隆1个MYB基因,命名为CtMYB1,GenBank登录号为KJ524853.CtMYB1基因全长893 bp,ORF为750 bp,编码249个氨基酸.同时,成功构建了该基因的原核表达载体.SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约30 000,与预测的蛋白相对分子质量一致.结论 成功克隆了CtMYB1基因,构建了原核表达载体,初步证明该基因在大肠杆菌中成功表达.