苦瓜谷氨酰胺合成酶基因(McGS1)原核表达载体的构建及表达分析

• 作者: 刘子记 刘昭华 扬衍 牛玉 申龙斌
• 来源期刊: 北方园艺
• 学科: 农学
• 关键词: 苦瓜 谷氨酰胺合成酶 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（22）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 110-113
• 分类号: S642.503.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.11937/bfyy.201522029

摘要

以"热研3号"苦瓜为试材,根据苦瓜谷氨酰胺合成酶基因(McGS1)全长序列信息设计引物,提取"热研3号"苦瓜总RNA并反转录成cDNA作为模板,通过PCR扩增、产物测序、酶切等方法与pET-30a(+)原核表达载体相连,构建苦瓜McGS1基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达分析,研究不同IPTG浓度及诱导时间对苦瓜McGS1基因蛋白在大肠杆菌BL21 (DE3)中表达的影响.结果表明:该研究成功构建了苦瓜McGS1基因的原核表达栽体,37℃、0.2 μmol/L IPTG诱导4h苦瓜McGS1基因蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中可高效表达,表达的蛋白质分子量约为35 kDa.